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LISTA DE EXAMES

Sequenciamento de DNA

O sequenciamento de DNA é um processo que determina a ordem dos nucleotídeos em uma amostra.

A MedGen recebe:

Produtos de PCR purificados e diluídos em água (na concentração mínima de 20 ng em até 5 ul de H2O). Para cada amostra enviada, a concentração deve estar devidamente especificada e o cliente deve fornecer o(s) primer(s) de sequenciamento (na concentração de 3.2 pmol em até 2 μl de H2O) para cada reação a ser realizada.
Plasmídeo purificado e diluído em água (na concentração mínima de 400ng em até 5ul de H2O). Para cada amostra enviada, a concentração deve estar devidamente especificada. O cliente deve fornece o(s) primer(s) de sequenciamento (na concentração de 3.2 pmol em até 2ul de H2O) para cada reação a ser realizada. A Genomic pode fornecer alguns primers universais para sequenciar DNA plasmidial. 

As amostras podem ser enviadas em tubos Eppendorf (até 16 amostras) via Sedex à temperatura ambiente. A partir de 17 amostras, receberemos apenas em placas para PCR de 96 poços.

Exceções: 

O cliente pode optar pelo serviço de purificação e quantificação do DNA plasmidial, pagando uma taxa adicional.

Caso a reação de sequenciamento do cliente não funcione, enquanto que a do controle apresente um resultado satisfatório, esta reação será cobrada. 

Todas as amostras para a reação de sequenciamento serão aceitas somente mediante a apresentação das mesmas em foto de gel após eletroforese. Esta foto deve incluir um marcador de peso molecular. Deve ser informado a quantidade das amostras aplicadas no gel (uL de amplicon/plasmídeo por poço).

Exemplos de Eletroforese de Amplicons aceitáveis:

Exemplos de Eletroforese de Amplicons inaceitáveis:

Lembramos aos clientes que a solicitação somente será aberta em nosso sistema quando a tabela e as amostras forem recebidas com a foto do gel. Após a confirmação de todos os dados, será contado o prazo para a entrega dos resultados. 

Para o envio de amostras para o serviço de sequenciamento, o cliente deve enviar uma planilha de excel (clique aqui para baixar) contendo as seguintes informações:

As reações de sequenciamento são realizadas usando o BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit da fabricante Thermo Fisher Scientific ou o BrightDye® Terminator Cycle Sequencing Kit da fabricante MCLAB (Molecular Cloning Laboratories). Os produtos de sequenciamento são submetidos à eletroforese em um sequenciador modelo 3130xl ou 3500 da Applied Biosystems. São processados lotes que incluem um controle de DNA plasmidial (pGEM, fornecido pela MedGen). Normalmente, nossas reações de sequenciamento alcançam 650 bases, com uma fidelidade de análise de 99%.

Os resultados são enviados por email. O cliente recebe um cromatograma (arquivo *.abi) sem edição e um arquivo texto da sequência editada para cada reação de sequenciamento. Consulte o prazo de entrega .

Para a leitura do arquivo *.ab1 será necessário o uso de softwares apropriados.

Estes softwares podem ser obtidos nas URLs:
http://www.mbio.ncsu.edu/BioEdit/BioEdit.html
http://www.technelysium.com.au/chromas.html
http://bat.infspire.org/genomepd/glass/
https://code.google.com/archive/p/seqtrace/
http://nucleobytes.com/4peaks/

Os arquivos dos cromatogramas são guardados permanentemente na MedGen. As amostras enviadas são descartadas 15 dias após o envio dos resultados e o cliente tem o mesmo período para questionar e/ou reclamar.

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SWAB BUCAL/SALIVA TUBO EDTA

DNA Mitocondrial

Normalmente, a identificação genética é realizada pela análise do DNA nuclear. Porém, um outro tipo de DNA pode ser analisado (o DNA mitocondrial - mtDNA).

O mtDNA apresenta um padrão de herança materna, ou seja, a sequência é idêntica para todos os familiares por parte de mãe (herança matrilinear). Pode ser usado para identificar pessoas desaparecidas, através de análise por comparação com parentes.

É útil, também, na identificação de materiais muito antigos ou em avançado grau de decomposição. A análise do mtDNA tem ajudado a solucionar diversos casos na genética forense, sendo utilizada com sucesso por laboratórios dos EUA e Europa.

A MedGen oferece esse serviço inovador no Brasil para a comunidade científica, justiça, polícia e exército.

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Clonagem

Clonagem molecular é o processo no qual um fragmento de DNA é inserido em um plasmídeo capaz de se replicar em um sistema bacteriano.

A intenção do procedimento é tornar possível a expansão do material de interesse a partir de culturas celulares e posteriormente extraí-lo em sistemas de purificação com colunas de sílica.

A MedGen oferece o serviço de clonagem de fragmentos de DNA em diferentes tipos de vetores. Temos um estoque de plasmídeos de clonagem, além de plasmídeos para expressão de proteínas recombinantes em bactérias, leveduras e células de mamíferos.

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Genomicalc

Perfil Genético

Normalmente o perfil genético é solicitado para criar a identidade genética do indivíduo. Essa identidade pode evitar  futuros constrangimentos ou ajudar a solucionar casos com mais rapidez.

A identidade genética pode ser utilizada para posterior análise de paternidade (evitando uma possível exumação), identificação individual em casos de desaparecimentos ou acidente em massa.

Esse tipo de pericia também pode ser realizada para confirmar se o DNA extraído em um outro laboratório é mesmo de determinado individuo, solicitado quando há suspeita de uma possível troca de material após a coleta.

O perfil genético dos bebês pode ser realizado logo após o nascimento e possibilita ter a identificação da criança, uma forte ferramenta em casos de troca na maternidade, futura necessidade em sequestros, desaparecimentos ou em casos de adoção.

Para essa identidade a MedGen pode analisar até 26 locos (partes do DNA), mais 16 locos dos cromossomos X e Y, tornando esse tipo de mapeamento ainda mais segura.

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Cromossomo X

Os exames de paternidade utilizando locos de STRs autossômicos gera índices muito satisfatórios. Porém, em casos de maior complexidade esse tipo de análise pode ser insuficiente.

Para esclarecer esses casos, oito locos de STRs situados no braço longo do cromossomo X são analisados (seguindo a normatização européia). O fato que homens possuem somente um cromossomo X, que é invariavelmente herdado por todas suas filhas, pode trazer vantagens neste tipo de perícia onde o indivíduo requerente é do sexo feminino e a transmissão do cromossomo X entre os periciandos pode ser inferida.

A MedGen realiza genotipagens apenas para cromossomo X, consulte nossos valores.

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O prazo de entrega do laudo será de no máximo 07 dias úteis.

Cromossomo Y

O cromossomo Y é herdado de uma maneira patrilinear, o que significa que todo indivíduo masculino em todas as gerações de uma família possui o mesmo cromossomo Y. A equivalência entre

dois cromossomos Y pode ser estabelecida analisando-se um conjunto de marcadores polimórficos ao longo deles, denominado de haplótipo.

O protocolo seguido pela MedGen analisa, a princípio, 8 marcadores genéticos (STRs) que já fazem parte de uma normatização européia.

Se dois homens tiverem haplótipos do cromossomo Y diferentes, isso indica que as origens patrilíneas são diferentes nesses indivíduos, o que exclui o vínculo genético paterno entre eles.

A MedGen aceita genotipagens para cromossomo Y, consulte nossos valores.

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SNPs e DIPs

Marcadores genéticos são definidos como elementos no DNA capazes de distinguir e caracterizar um indivíduo e que são transmitidos aos descendentes. Os STRs (do inglês, Short Tandem Repeats) são os marcadores mais comumente utilizados em exames de vínculo genético. Entretanto, em casos cujas amostras apresentam alto grau de decomposição faz-se necessário o uso de marcadores alternativos como SNPs e INDELs.

Os SNPs (do inglês, Single Nucleotide Polymorphism) são variações pontuais encontradas ao longo do DNA, isto é, são diferenças num único nucleotídeo. Já os polimorfismos de inserção e deleção (INDEL: de INserções e DELeções) são trechos de dois ou mais nucleotídeos que podem estar presentes (inserção) ou ausentes (deleção) nas fitas de DNA de um indivíduo. Ambos são frequentes no genoma humano e apresentam distintas vantagens em estudos forenses e populacionais.

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A MedGen dispõe de painéis de 70 SNPs e de 40 INDELs para a resolução de casos forenses ou em situações cujos marcadores tradicionais suscitem dúvidas no resultado final.

Ligue para (34) 3016-9777 ou preencha o formulário abaixo. Entraremos em contato para confirmar seu pedido de exame e esclarecer eventuais dúvidas sobre indicações, métodos, requerimentos e preços.

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